10x Genomics 单细胞转录组测序
项目简介
10x Genomics 单细胞转录组测序
普通的转录组测序获得的是细胞群整体的基因转录信息,得到的测序信号也是细胞群的平均信号,这无法获得不同细胞内不同表达信息的数据也无法解决肿瘤内组织异质性问题。而单细胞测序是将细胞群或者组织块分离成单个细胞并分别进行标记,最终获得每个细胞的转录本信息。利用单细胞测序研究者可以从单个细胞水平对疾病发展中免疫细胞分化、肿瘤异质性和组织发育等方面进行深入探究。
表观生物推出10x Genomics单细胞转录组测序服务,与BD Rhapsody平台的单细胞转录组测序互补,客户可根据自身研究项目的研究目的选择合适的平台解决方案。
技术原理
1. 每个Chromium 解决方案都从高度多样化的凝胶珠(Gel Beads)开始,每个凝胶珠都带有独特的寡核苷酸条形码序列,以及便于捕获目标分子的功能化序列。
2. 在Chromium 系统内,将带有条形码的凝胶珠与细胞或细胞核、酶以及分液油混合,产生成千上万个单细胞乳液微滴,这些微滴被称为“GEM”(Gel Bead-inemulsion)。
3. 每个GEM 都作为单独的反应囊泡,凝胶珠在其中溶解,捕获每个细胞的目标分子,添加条形码并扩增。
4. 扩增后,来自同一细胞的所有片段都共享一个10x 条形码。将成千上万个细胞的带有条形码的产物混合,进行下游反应,从而产生与短读长测序仪兼容的文库。
5. 在测序后,全方位的生物信息学工具将利用可识别的条形码序列将测序片段定位到原本的单细胞或细胞核。
送样要求
样本物种: 仅限人源样本,其它样本需要评估。
>5×10⁵
细胞数量
1000个/μL
细胞浓度
5μm - 40μm
细胞尺径
>80%
细胞活性
技术应用与优势
技术应用
1、构建大规模细胞图谱;
2、鉴定和发现稀有细胞亚型;
3、可探究肿瘤的异质性、微环境、耐药机制;
4、干细胞发育及分化;
技术优势
1、Chromium Controller 和Chromium Connect系统采用先进的微流体技术,可在几分钟内完成单细胞微滴生成和条形码标记;
2、技术发展成熟,操作稳定性高;
3、能够从多个角度捕获细胞活性的分子快照,包括基因表达、细胞表面蛋白、免疫克隆型、抗原特异性、染色质可接近性以及拷贝数变异,适用于多组学联合研究。
分析流程
分析内容
1. 细胞数目鉴定
2. 基因组比对
3. counts计算
4. 双细胞过滤
5. 低质量细胞过滤
6. 标准化
7. PCA主成分降维
8. TSNE或UMAP降维
9. 细胞cluster鉴定
10. 细胞marker分析
11. 细胞类型注释
12. 细胞子群深入分析(需客户指定感兴趣的细胞类群,高级分析)
13. 组间细胞比例差异分析
14. 组间同类细胞差异基因分析
15. 组间同类细胞差异基因功能富集分析
16. 细胞分化轨迹分析(高级分析)
17. 细胞基因调控网络状态分析(高级分析)
18. 细胞特异转录因子鉴定(高级分析)
19. 细胞互作分析(高级分析)