DNA甲基化
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DNA甲基化检测服务(Bisulfite sequencing PCR,BSP)
发布时间:2017-09-07 09:29:36 | 浏览次数:

        亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCRBSP)的DNA甲基化检测方法具有较高可靠性及精确度,能精确得出片段中每一个CpG位点的甲基化状态。


        实验原理
       用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。针对目标区域设计BSP引物进行PCR扩增,对扩增产物进行测序就可以判断哪些CpG位点发生了甲基化;一般将PCR产物克隆后进行测序成功率会比较高。
 
       

       服务的流程
1.  BSP引物设计:针对感兴趣的基因区域进行BSP引物的设计
2.  亚硫酸氢盐处理基因组DNA:提取基因组DNA并进行亚硫酸氢盐的转化
3.  PCR扩增目的片段:BSP引物扩增感兴趣的区域
4.  克隆到载体:将PCR产物纯化后连接到载体上
5.  克隆测序:挑取阳性菌斑,提取质粒并测序(10个克隆)
6.  序列分析:对测序的结果进行比对和甲基化分析


       项目周期
15-20个工作日


      项目交付
1、提供完整实验报告
2、电泳图谱
3、测序图谱
4、序列比对图谱
5、分析数据


     注意事项
1、客户提供:要调查的基因名称、种属,要调查的甲基化区域或位点;
2、样品要求:细胞≥105个;组织≥100mg;全血≥0.5ml;基因组DNA ≥5ug                     
3、所有样品建议干冰寄送,保持低温,保证样品质量;
4、每个检测片段序列长度不超过350bp


 
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